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實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶(hù)盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱(chēng)和ID號(hào)；
3）客戶(hù)盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。

實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。 
10×PCR buffer 
5 μl     dNTP mix （2mM） 
4 μl     引物1（10pM） 
2 μl     引物2（10pM） 
2 μl     Taq酶 （2U/μl） 
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl） 
1 μl      加ddH2O至 50 μl 

PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品：用無(wú)菌注射器抽取受檢者血2mL，注入無(wú)菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽(yáng)性對(duì)照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專(zhuān)用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用
6. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。放冰上待用。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，*通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi)，探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-DUKXB11-TGF-β Dinding Protein cDNA泛酸鈣,維生素B5D-Calcium Panthotenate 質(zhì)量規(guī)格：供HPLC法含量測(cè)定用

AR42J細(xì)胞，*細(xì)胞 皮膚成纖維細(xì)胞系,BJ細(xì)胞 小鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞;Neuro-2a [N2a; Neuro-2a]鹽酸特拉唑嗪（標(biāo)準(zhǔn)品）Terazosin HCl質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定

HT-29(細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2氯化鈉（標(biāo)準(zhǔn)品） chloride質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定

Gibco 17105041 中性蛋白酶Dispase II, powder 5 g氨力農(nóng)（標(biāo)準(zhǔn)品）Amrinone質(zhì)量規(guī)格：UV法含量測(cè)定

膀胱平滑肌細(xì)胞裂解物HBdSMCL更昔洛韋（標(biāo)準(zhǔn)品）Ganciclovir質(zhì)量規(guī)格：含量測(cè)定
肝細(xì)胞培養(yǎng)基HM-prf3,5-二甲氧基-4-羥基肉桂酸(>99.0%(GC)(T))3,5-Dimethoxy-4-hydroxycinnamic Acid 質(zhì)量規(guī)格：>99.0%(GC)(T)

REG4 Others Human  REG4 / RELP / GISP 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 4'-羥基偶氮苯-2-羧酸(>98.0%(HPLC)(T))4'-Hydroxyazobenzene-2-carboxylic Acid質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(T)

EB病毒轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞;KM94012',3'-二脫氧尿苷(ddU)2',3'-Dideoxyuridine質(zhì)量規(guī)格：>98%,進(jìn)分

HNE2細(xì)胞，細(xì)胞 小鼠瘤細(xì)胞,Yac-1細(xì)胞 CM-H014氣管平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL潮霉素BHygromycin B質(zhì)量規(guī)格：>90%,粉末,進(jìn)分

Neuro-2a/N2a(小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×25'-O-(4,4'-二甲氧基三苯基)-N2-異丁?；?span>-2'-脫氧鳥(niǎo)苷(DMT-ibu- dG)iBu-DMT-dG質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
滋養(yǎng)層絨毛細(xì)胞總RNAHVT NA偏苯三1(>95.0%(T))Trimellitic Anhydride質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(T)

小鼠神經(jīng)皮質(zhì)細(xì)胞(MN-c)(1×106)2,4-二氨基-6-異丙氧基-1,3,5-三嗪(>98.0%(T))2,4-Diamino-6-isopropoxy-1,3,5-triazine質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

家貓皮膚細(xì)胞;FCA-S12,4-二氨基-1,3,5-三嗪(>98.0%(T))2,4-Diamino-1,3,5-triazine質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

小鼠B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞;W6/32 小鼠成年表皮角質(zhì)形成層細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL2,4-氨基-6-甲氧基-1,3,5-三嗪(>98.0%(T))2,4-Diamino-6-methoxy-1,3,5-triazine質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)

SF9, 昆蟲(chóng)卵巢細(xì)胞 其它2,4-二氨基-6-二甲氨基-1,3,5-三嗪(>98.0%(T))2,4-Diamino-6-dimethylamino-1,3,5-triazine質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)
CL-0397NCI-H23(非小細(xì)胞細(xì)胞)5×106cells/瓶×2藍(lán)銅肽/甘氨酰-L-組氨酰-L-賴(lài)氨酸質(zhì)量規(guī)格：>98.5%GHKcu/Growth-modulating peptide

絨毛膜間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞 Sars蛋白表達(dá)株，293001B細(xì)胞 NCI-H520 [H520](細(xì)胞)氨苯蝶啶 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRTriamterene

高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株;PC-3M IE8卡拉膠質(zhì)量規(guī)格：粘度≥0.005 pa.sCarrageenan

BSG Others Mouse 小鼠 CD147 / EMMPRIN / Basigin 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 普侖司特質(zhì)量規(guī)格：≥98%,BRPranlukast

EB病毒轉(zhuǎn)化的B細(xì)胞;KMY09031酸美托洛爾質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRMetoprolol tartrate

地衣形芽孢桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。