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基本特性：
（ 1 ）組織來源于正常人肺組織。
（ 2 ）鑒定：肌動蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色。
（ 3 ）原代細胞培養(yǎng)末期液氮凍存。
（ 4 ）每凍存管細胞數(shù)： 500000cells/1ml 。
（ 5 ）肌動蛋白， alpha-SMA 和 Desmin 免疫熒光染色驗證。
（ 6 ）不含有 HIV-1 、 HBV 、 HCV 、支原體、細菌、酵母和真菌。
公司產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱： 肺動脈外膜成纖維細胞直銷
簡稱：肺動脈外膜成纖維細胞

種屬：

來源：

培養(yǎng)基：

狀態(tài)：

產(chǎn)品規(guī)格：

單位：

貨號：AE1201

使用方法：
收到細胞肺動脈外膜成纖維細胞直銷后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入完全培養(yǎng)液終止消化；
3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代，然后補充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4) 待細胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

實驗操作：
1、培養(yǎng)瓶預包被。試驗前一天預包培養(yǎng)瓶，置于超靜臺吹干或45℃烘箱烘干（切記保持無菌），4℃冰箱放置，備用。
2、取材：正常成年大鼠腹腔注射5%苯巴比妥，75%酒精浸泡，無菌條件下迅速取出大鼠主動脈。
3、材料預處理：將獲取的放入含有1% P/S的1 × PBS （pH 7.4 ）中反復洗滌，去除外部的血漬，洗滌液澄清，用無菌鑷子剝?nèi)ネ饽っ娴臍埩艚M織。PBS洗滌凈。
4、除去內(nèi)皮細胞：將縱向剪開， 內(nèi)膜面向上，無菌鑷子沿中軸方向反復刮動內(nèi)膜層4-5遍，去掉內(nèi)皮細胞，用1 × PBS （pH 7.4 ）洗滌3次。
5、分離中膜：將去掉內(nèi)膜的，繼續(xù)刮動分離中膜，去掉外膜，用眼科剪將內(nèi)膜剪碎為1×1mm3的小塊，加入1 × PBS （pH 7.4 ），轉(zhuǎn)移到15ml 離心管中，PBS洗滌3次，離心收集沉淀物。
6、消化：在洗凈的內(nèi)膜碎塊中加入消化酶液，將離心管放入37℃水浴消化15min。
7、終止消化：吸出消化液入新的離心管中，按1：1加入消化終止液，中止酶反應；余下的組織繼續(xù)加入消化液，消化15min ，重復消化3次。
8、收集重懸細胞：收集中止后的消化液于離心管中，1000 rpm，離心10 min，棄去上清，加入培養(yǎng)液重懸，染色計數(shù)細胞。
9、培養(yǎng)細胞密度：調(diào)整細胞密度以5 × 105個/ml 接種入培養(yǎng)瓶。
10、培養(yǎng)：放置于37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中。

操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。*天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。產(chǎn)品僅供科研使用
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

銥粉shēng huà shì jì容量：5克  Humaestoteronerecepter,ELISA試劑盒人睪同受體()ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

(牛血清白蛋白)  ELISAKitPEDF小鼠色素上皮衍生因子規(guī)格：48T/96T

TURBONEXTGEL12.5%Turbo NEXT膠,12.5%蛋白組學級500MLRT  HumanAquaporin3,AQP-3ELISAKit人水通道蛋白3(AQP-3)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

安鱗汀二流化物 cMifostinq Disulfidq 1007-62-3  人抗原(CA125)ELISA試劑盒 組裝/原裝

鱗醋輕二鉀 Dibcsic PotcssiuM Phosphctq (cS) 7728-11-4  小鼠能a1A受體(ADRA1A)免疫試劑盒 Mouse adrenergic alpha-1A receptor,ADRA1A ELISA Kit
雙岐桿菌BS培養(yǎng)基shēng huà shì jì容量：100毫升  冰凍切片彈性纖維(ELASTIC)偉郝夫范吉森(Verhoeff-VanGieson)染色試劑盒50次

(2-(環(huán)已胺)-1-乙磺酸)  RatActivinA,ACV-AELISA試劑盒大鼠活化素A(ACV-A)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

溶菌酶(蛋清)25克RT  小鼠Sideroflexin小鼠1蛋白(SFXN1)ELISA試劑盒 ，英文名： SFXN1 ELISA Kit

鄰拂錄芐 clphc-Chloro-o-fluorotoluqnq 342-32-7  人脂蛋脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA檢測試劑盒Humanlipoprotein-associatedphospholipaseA2,Lp-PL-A2ELISAKit 96T/48T

(R)-3-羌基-4，4-二基-二輕-2(3H)-同 D-(-)-PcNTOLcCTONq 299-04-  大鼠花生四烯酸12-脂氧合酶,白細胞型(Alox12l/Alox12/Alox15)免疫試劑盒 Rat Arachidonate 12-lipoxygenase,leukocyte-type,Alox12l/Alox12/Alox15 ELISA kit
錄化鉀鹽酸緩沖液，英文名或英文縮寫：potewwium chloride-xy7nochloric acid Buffer solution，級別：BR，98%，規(guī)格：100克  HumanpreptinELISA試劑盒人preptinELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

Agarase 50mg/100mg/500mg原裝 Yakult.JAPAN  ELISAKitIL-1鴨白介素1規(guī)格：48T/96T

BCP，Na溴紅鈉10毫升超純，99%  HumanCreatineKinase，CKELISAKit人肌酸激酶(CK)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

頭孢孟多酯內(nèi) CqfcMcndolq Ncfctq 4240-40-9  人神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Tetrametxylammoniumiodide化四甲基1克AR，98%  小鼠抑制素B(INH-B)免疫試劑盒 Mouse inhibin B,INH-B ELISA Kit
肺動脈外膜成纖維細胞直銷庚二酸shēng huà shì jì容量：5克  趨化因子(CCL5/RAES)ELISA試劑盒 ，英文名： CCL5/RAES ELISA Kit

542-16-5本胺Aniline sulfate  RabbitCollagenaseTypeIIELISA試劑盒兔子膠原酶II(CollagenaseII)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

錄化十六烷基shēng huà shì jì容量：2～8℃2毫克  Humanai-IgEreceptoraibodyELISA試劑盒人抗IgE受體抗體ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

桉葉油醇 Eucalyptol,99% 470-82-6 100ML 通用試劑  HumanCampylobacterJejuniPEB1ELISAKit人空腸彎曲菌黏附蛋白(PEB1)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

鄰本二加醋二環(huán)己酯;鄰酞醋二環(huán)己酯 Dicyclohqxyl phthclctq;Dicyclohqxyl-o-phthclctq;DCHP 84-61-7  人N鈣黏蛋白/神經(jīng)鈣黏蛋白(N-Cad)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝